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常見(jiàn)的生化試劑究竟有多少種?

2020-10-14

  隨著生命科學(xué)的發(fā)展,生化試劑已發(fā)展成為化學(xué)試劑的一大類(lèi),有商品10000多種。中國(guó)銷(xiāo)售的生化試劑品種有2500多種。目前在國(guó)內(nèi),生化試劑涵蓋肝功、腎功、血脂、心肌、胰腺、特殊蛋白等,能夠滿(mǎn)足終端用戶(hù)的各種生化檢測(cè)需求。

  生化試劑的概念

  生化試劑是從生物體中提取的或由化學(xué)合成的生物體的基本成分,用于生物成分的分析鑒定及生物制品的制造。生化試劑主要是針對(duì)血常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、胰腺、糖尿等疾病的診斷試劑。生化診斷是早實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的檢測(cè)手段,也是目前常用的體外診斷方法之一。

  常見(jiàn)的生化試劑種類(lèi)

  1、蛋白酶K

  能水解消化蛋白質(zhì),特別是與DNA結(jié)合的組蛋白。再尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml,推薦反應(yīng)緩沖液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。

  2、SDS

  十二烷基硫酸鈉溶解細(xì)胞膜上的脂類(lèi)與蛋白質(zhì),因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜,并解離細(xì)胞中的核蛋白,SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。

  3、IPTG

  異丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等. IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似,所以它和乳糖一樣,可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,四聚體解聚成單體,失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,從而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類(lèi)。

  與乳糖不同的是,IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定。

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  4、MOPS

  一種緩沖液,有抑制RNA酶的作用,一般和甲醛(用于變形RNA)用于RNA變性電泳。

  5、鹽酸胍

  鹽酸胍等可使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的氫鍵發(fā)生斷裂,這增加了非極性分子包括氨基酸側(cè)鏈的溶解度,減少了疏水相互作用。

  6、吖啶橙

  是一種熒光色素,與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別,可發(fā)出不同顏色的熒光,與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光,與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性,能透過(guò)細(xì)胞膜,使核DNA和RNA染色。

  在熒光顯微鏡下觀察,吖啶橙可透過(guò)正常細(xì)胞膜,使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光;而在凋亡細(xì)胞中,因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷,形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光,或黃綠色碎片顆粒;而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。

  吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染,因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光,由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。它還可以用作移碼突變的誘變劑,能鑲嵌于兩個(gè)相鄰的堿基對(duì)之間,這樣在DNA復(fù)制過(guò)程中,會(huì)使DNA鏈增加或缺失一個(gè)堿基,造成移碼突變。吖啶橙染液有毒,操作時(shí)要戴手套,需避光。

  7、DMSO

  二甲基亞砜實(shí)驗(yàn)室常用于作液體層析溶劑,同時(shí)用作測(cè)試物質(zhì)紫外消光值上時(shí)用作參照物,能溶于所有烷烴和烯烴。

  8、TRICINE

  N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸, 常見(jiàn)的電泳系統(tǒng)是Tris-甘氨酸系統(tǒng);Tris-Tricine電泳則用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的電泳,能夠獲得較好的分離效果. 可以用前者代替。

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