目前,市場上的國產(chǎn)和進(jìn)口試劑盒數(shù)量繁多,令人目不暇接,質(zhì)量問題也是廣大科研愛好者和研究人員的一個棘手問題,所以下面我們告訴您在選購試劑盒時應(yīng)該注意的事項(xiàng):
1.檢測方法
酶可以與一抗或二抗結(jié)合,用鏈霉親和素標(biāo)記的酶也可以與用鏈霉親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。
此外,對試劑盒結(jié)果的檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色檢測等。
現(xiàn)在測試的方式很多,可以根據(jù)自己的喜好來選擇。
一般檢測酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體結(jié)合相應(yīng)的酶(如常用的辣根過氧化物酶),而反應(yīng)體系中加入相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。
這種酶促反應(yīng)產(chǎn)生特征顏色,可以用分光光度計檢測。堿性磷酸酶AP也是一種常見的酶。
2.分析抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都可以用于試劑盒中,事實(shí)上,有時它們的結(jié)合效果更好。例如,對于雙抗體夾心法,有時用多種抗體捕獲并用單克隆抗體檢測更有幫助。
多抗體可以保證捕獲所有抗原,然后單克隆抗體重新特異性檢測具有特定表位的抗原。
3.交叉生成反應(yīng)
如果抗體之間有沖突或交叉反應(yīng),就會影響整個實(shí)驗(yàn)的特異性。其中,抗體來源的相容性是交叉反應(yīng)的一個因素。
雖然現(xiàn)在從動物身上買抗體比較容易,但還是要確認(rèn)是否會有交叉反應(yīng)。使用雙抗體夾心法檢測時,用于檢測的二抗得要對檢測一抗具有特異性,不能與捕獲抗體發(fā)生反應(yīng)。