一、原理

　　酵母和霉菌是3M檢測(cè)片。(PctrifilmTMYeastandMold,PYM)測(cè)試片是一種預(yù)先準(zhǔn)備好培養(yǎng)基的霉菌和酵母計(jì)數(shù)的卡片。培養(yǎng)基中有冷水可溶性凝膠作為載體，以及5-溴-4-氯-3消化氯-磷酸鹽指示劑作為酵母和霉菌，以及抑制生長(zhǎng)的四環(huán)素和氯霉素。圓形生長(zhǎng)區(qū)分為30個(gè)1cmx1cm的方塊進(jìn)行計(jì)數(shù)。

　　設(shè)備和材料

　　溫度培養(yǎng)箱(25℃~28℃)、冰箱(0℃~4℃)、均質(zhì)器(旋刀式或拍擊式)、移液器、PctrifilmTM測(cè)試片壓板、振蕩器、天平(感量0.1g),PctrifilmTM酵母和霉菌測(cè)試片，稀釋劑，培養(yǎng)基和試劑，Butterfield's磷酸鹽緩沖液，0.1%蛋白質(zhì)水。

　　三、步驟

　　1.固體

　　8000r/min均質(zhì)2min(或放入無(wú)菌均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器拍打2min)，在225毫升稀釋液(磷酸鹽緩沖液或0.1%蛋白水)中加入25g樣品，制成11。:10樣品勻液。

　　2.液體

　　取25mL樣品原液，放入裝有225mL、稀釋液的無(wú)菌玻璃瓶中，以30cm的幅度，在7s內(nèi)震動(dòng)25次，制成1:10樣品勻液。

　　用10倍的梯度稀釋上述勻液，根據(jù)樣品的污染程度，選擇2-3個(gè)合適的連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種2個(gè)測(cè)試片。

　　在平坦的試驗(yàn)臺(tái)上放置3M試驗(yàn)片PYM試驗(yàn)片，揭開(kāi)上膜，用移液器在3M試驗(yàn)片中間加入1ml樣液，輕輕覆蓋上膜，用壓板平穩(wěn)壓下，使其均勻覆蓋在試驗(yàn)片的圓形培養(yǎng)面積上，拿起壓板，靜置1min以上，使培養(yǎng)基凝固。

　　在25℃-28℃下，將測(cè)試片的透明面朝上放置在培養(yǎng)箱內(nèi)，堆放不得超過(guò)20片，培養(yǎng)3d-5d。

　　3.判讀

　　培養(yǎng)3d后觀察計(jì)數(shù)。如果測(cè)試片上的細(xì)菌在5d后生長(zhǎng)過(guò)快，出現(xiàn)邊緣模糊的菌落，則使用3d的計(jì)數(shù)結(jié)果來(lái)估計(jì)菌落數(shù)。

　　在PYM測(cè)試片中，顏色均勻，灰白色到藍(lán)綠色或粉紅色，沒(méi)有深色中間，邊界上的小隆起菌被計(jì)算成酵母菌。顏色多樣(棕色、米色、橙色、藍(lán)綠色等。)、大型或小型扁平擴(kuò)散菌落的中間顏色為霉菌。估計(jì)菌落數(shù)。

　　在PYM測(cè)試片中，顏色均勻，灰白色至藍(lán)綠色或粉紅色，無(wú)深色中心，邊界明顯的小隆起菌被計(jì)算為酵母。顏色多樣(棕色、米色、橙色、藍(lán)綠色等)。)、大型或小型扁平擴(kuò)散菌落的中心顏色為霉菌。