希望大家不要忘記在夏日出行少吃路邊攤,去衛(wèi)生條件好的地方就餐,避免食用未煮熟的食物,謹防沙門氏菌感染,能夠度過一個愉快、涼爽的夏天。
一.檢驗沙門氏菌的原因和意義:
據(jù)統(tǒng)計我國細菌性食物中毒中70%~80%是由沙門氏菌引起的,人一旦攝入含有大量沙門氏菌(10E5~10E6個/g)的動物性產(chǎn)品,就會引起細菌性感染,進而在毒素作用下發(fā)生食物中毒導致胃腸炎、傷寒和副傷寒且沙門氏菌的傳播媒介眾多,肉、蛋以及食品從加工到出售的過程中都十分容易發(fā)生污染。因此對沙門氏菌的檢驗事關重大。
二.檢測沙門氏菌的環(huán)境:
沙門氏菌的檢測要在二級生物安全實驗室及二級生物安全柜(在負壓情況下防止致病微生物氣溶膠飄離實驗室對實驗人員及環(huán)境造成污染)中進行。
三.檢測過程中的相關培養(yǎng)基試劑解讀:
1.前增菌(無選擇性):
緩沖蛋白胨水(BPW)是基礎增菌培養(yǎng)基,不含任何抑制成分,有利于受損傷的沙門氏菌復蘇。使受損傷的沙門氏菌細胞恢復到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。
2.選擇性增菌:
四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB)中的硫代硫酸鈉和四硫磺酸鈉結合可抑制腸道共生菌,而具有四硫磺酸鈉還原酶的細菌能在此培養(yǎng)基中繁殖;膽鹽和煌綠可抑制大腸群菌和其它革蘭氏陽性細菌生長,而傷寒與副傷寒沙門氏菌仍能生長。
亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC)可對傷寒及其他沙門氏菌作選擇性增菌,其成分中的亞硒酸與蛋白胨中的含硫氨基酸結合,形成亞硒酸和硫的復合物,影響細菌硫代謝,從而抑制大腸埃希氏菌、腸球菌和變形桿菌的增殖。
3.分離培養(yǎng)基(選擇性):
①亞硫酸鉍瓊脂(BS)中的亞硫酸鉍指示劑抑制革蘭氏陽性菌和大腸菌群,但不影響沙門氏菌的生長;傷寒桿菌及其他沙門氏菌能利用葡萄糖將亞硫酸鉍還原成硫酸鉍,形成黑色菌落周圍繞有黑色和棕色的環(huán),對光觀察可見有金屬光澤。
BS不能高壓,不能過分加熱,以免降低其選擇性,應在臨用時配制,保存在陰暗處,48h后失去選擇性,保存不當導致顏色變淺說明已經(jīng)開始減效,與TTB(TTB的添加劑必須在棕色瓶儲存,不能見光,否則選擇性減弱。TTB有用于消除和吸收有毒代謝產(chǎn)物的碳酸鈣容易產(chǎn)生沉淀,分裝時一定要搖勻。TTB加入添加劑后就不能再加熱。)或SC(SC中含有劇毒物質(zhì)亞硒酸氫鈉,使用時候要注意安全,當天使用當天配置。)合用可獲得更高的檢出率。
沙門氏菌在BS上的菌落形態(tài):產(chǎn)H2S的菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色。菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色,有些不產(chǎn)H2S的菌落,形成灰綠的菌落,周圍培養(yǎng)基不變。
②HE瓊脂中的膽鹽、去氧膽酸鈉、溴麝香草酚蘭和酸性復紅抑制革蘭氏陽性菌生長;硫代硫酸鈉和檸檬酸鐵銨用于檢測H2S的產(chǎn)生,使菌落中心呈黑色;溴麝香草酚蘭和酸性復紅為pH指示劑,發(fā)酵糖產(chǎn)酸的菌落呈橙-黃色,不發(fā)酵糖的菌落為藍綠色。
HE不能高壓滅菌,煮沸不能超過1min,水浴中冷卻,只能保存一天。
沙門氏菌在HE瓊脂上的菌落形態(tài):藍綠色或藍色,多數(shù)菌株產(chǎn)H2S,中心呈黑色或幾乎全黑色。有些菌株為黃色,中心呈黑色或幾乎全黑色。
③XLD瓊脂中的去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌生長,在此濃度下也同時作為大腸埃希氏菌的抑制劑但不影響沙門氏菌和志賀菌屬的生長的生長;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原成H2S,與檸檬酸鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵。
XLD平板不能高壓,不能過熱煮沸,保存一天。XLD培養(yǎng)基分離沙門氏菌和志賀菌的敏感性超過了傳統(tǒng)的培養(yǎng)基,如:EMB、SS、BS。因這些培養(yǎng)基尚有抑制志賀菌屬生長的潛在因素,故本培養(yǎng)基是分離鑒定沙門氏菌及志賀菌屬的可靠培養(yǎng)基。在國外廣泛使用。
沙門氏菌在XLD上的菌落形態(tài):粉紅色帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心或呈現(xiàn)全部黑色的菌落;有些菌落為黃色,帶或不帶黑色中心。
④沙門氏菌顯色培養(yǎng)基主要用于快速篩選、分離沙門氏菌。其基本原理是利用沙門氏菌特異性酶與顯色基團的特有反應,使色原游離出來,從而使沙門氏菌在培養(yǎng)基上呈現(xiàn)特定的顏色(具體顏色查看相關品牌顯色培養(yǎng)基使用說明書)而大腸桿菌等其他腸道桿菌呈其他顏色。