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重慶3M測(cè)試片
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微生物生長(zhǎng)的檢測(cè)方法,你知道嗎?

2020-12-03

  一個(gè)微生物細(xì)胞在合適的外界條件下,不斷的吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),并按自己的代謝方式進(jìn)行新陳代謝。如果同化作用的速度超過(guò)了異化作用,則其原生質(zhì)的總量(重量,體積,大?。┚筒粩嘣黾樱谑浅霈F(xiàn)了個(gè)體的生長(zhǎng)現(xiàn)象。如果這是一種平衡生長(zhǎng),即各細(xì)胞組分是按恰當(dāng)?shù)谋壤鲩L(zhǎng)時(shí),則達(dá)到一定程度后就會(huì)發(fā)生繁殖,從而引起個(gè)體數(shù)目的增加,這時(shí),原有的個(gè)體已經(jīng)發(fā)展成一個(gè)群體。隨著群體中各個(gè)個(gè)體的進(jìn)一步生長(zhǎng),就引起了這一群體的生長(zhǎng),這可從其體積、重量、密度或濃度作指標(biāo)來(lái)衡量。

  微生物的生長(zhǎng)不同于其他生物的生長(zhǎng),微生物的個(gè)體生長(zhǎng)在科研上有一定困難,通常情況下也沒(méi)有實(shí)際意義。微生物是以量取勝的,因此,微生物的生長(zhǎng)通常指群體的擴(kuò)增。微生物的生長(zhǎng)繁殖是其在內(nèi)外各種環(huán)境因素相互作用下的綜合反映。因此生長(zhǎng)繁殖情況就可作為研究各種生理生化和遺傳等問(wèn)題的重要指標(biāo),同時(shí),微生物在生產(chǎn)實(shí)踐上的各種應(yīng)用或是對(duì)致病,霉腐微生物的防治都和他們的生長(zhǎng)抑制緊密相關(guān)。所以有必要介紹一下微生物生長(zhǎng)情況的檢測(cè)方法。既然生長(zhǎng)意味著原生質(zhì)含量的增加,所以測(cè)定的方法也都直接或間接的以次為根據(jù),而測(cè)定繁殖則都要建立在計(jì)數(shù)這一基礎(chǔ)上。微生物生長(zhǎng)的衡量,可以從其重量,體積,密度,濃度,做指標(biāo)來(lái)進(jìn)行衡量。

  生長(zhǎng)量測(cè)定法

  體積測(cè)量法:又稱測(cè)菌絲濃度法。

  通過(guò)測(cè)定一定體積培養(yǎng)液中所含菌絲的量來(lái)反映微生物的生長(zhǎng)狀況。方法是,取一定量的待測(cè)培養(yǎng)液(如10毫升)放在有刻度的離心管中,設(shè)定一定的離心時(shí)間(如5分鐘)和轉(zhuǎn)速(如5000 rpm),離心后,倒出上清夜,測(cè)出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測(cè)定法是大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)上微生物生長(zhǎng)的一個(gè)重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)。這種方法比較粗放,簡(jiǎn)便,快速,但需要設(shè)定一致的處理?xiàng)l件,否則偏差很大,由于離心沉淀物中夾雜有一些固體營(yíng)養(yǎng)物,結(jié)果會(huì)有一定偏差。

  稱干重法:

  可用離心或過(guò)濾法測(cè)定。一般干重為濕重的10-20%。在離心法中,將一定體積待測(cè)培養(yǎng)液倒入離心管中,設(shè)定一定的離心時(shí)間和轉(zhuǎn)速,進(jìn)行離心,并用清水離心洗滌1-5次,進(jìn)行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干,或采用紅外線烘干,也可在80℃或40℃下真空干燥,干燥后稱重。如用過(guò)濾法,絲狀真菌可用濾紙過(guò)濾,細(xì)菌可用醋酸纖維膜等濾膜過(guò)濾,過(guò)濾后用少量水洗滌,在40℃下進(jìn)行真空干燥。稱干重發(fā)法較為煩瑣,通常獲取的微生物產(chǎn)品為菌體時(shí),常采用這種方法,如活性干酵母(activity  dry  yeast, ADY),一些以微生物菌體為活性物質(zhì)的飼料和肥料。

  比濁法:

  微生物的生長(zhǎng)引起培養(yǎng)物混濁度的增高。通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)定一定波長(zhǎng)下的吸光值,判斷微生物的生長(zhǎng)狀況。對(duì)某一培養(yǎng)物內(nèi)的菌體生長(zhǎng)作定時(shí)跟蹤時(shí),可采用一種特制的有側(cè)臂的三角燒瓶。將側(cè)臂插入光電比色計(jì)的比色座孔中,即可隨時(shí)測(cè)定其生長(zhǎng)情況,而不必取菌液。該法主要用于發(fā)酵工業(yè)菌體生長(zhǎng)監(jiān)測(cè)。如我所使用UNICO公司的紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì),在波長(zhǎng)600nm 處用比色管定時(shí)測(cè)定發(fā)酵液的吸光光度值OD600,以此監(jiān)控E.Coli的生長(zhǎng)及誘導(dǎo)時(shí)間。


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