亦稱傳代培養(yǎng)保藏法，包括斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、液體培養(yǎng)等。是指將菌種接種于適宜的培養(yǎng)基中，條件下培養(yǎng)，待生長(zhǎng)充分后，于4～6℃進(jìn)行保存并間隔一定時(shí)間進(jìn)行移植培養(yǎng)的菌種保藏方法。

　　操作步驟如下：

　　培養(yǎng)基制備

　　1、器皿準(zhǔn)備

　　培養(yǎng)基制備過程中所用的一些玻璃器皿，如，三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、燒杯、吸管等，經(jīng)洗滌、干燥、包裝、滅菌后使用。

　　2、溶解培養(yǎng)基配料

　　先在燒杯中放適量水，按培養(yǎng)基配方稱取各項(xiàng)材料，依次將緩沖化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，加足水量，攪拌均勻。

　　3、調(diào)pH值

　　配料溶解后將培養(yǎng)基冷卻至室溫，根據(jù)要求加稀酸（0.1mol/L鹽酸）或稀堿(10%氫氧化鈉)調(diào)pH值。加酸或堿液時(shí)要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過堿或過酸而導(dǎo)致測(cè)量不準(zhǔn)確和營(yíng)養(yǎng)成分被破壞。

　　4、加凝固劑

　　配制固體培養(yǎng)基時(shí)需加凝固劑，如，瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養(yǎng)基中，加熱并不斷攪拌至融解，再補(bǔ)足所蒸發(fā)水分。

　　5、過濾分裝

　　在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養(yǎng)基趁熱過濾并分裝。斜面培養(yǎng)基分裝量約為試管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培養(yǎng)基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過程中勿使培養(yǎng)基沾污管口，以免弄濕棉塞造成污染。

　　6、包扎標(biāo)記

　　將試管加棉塞，外面包扎一層牛皮紙或鋁箔并注明培養(yǎng)基名稱及配制日期。

　　7、滅菌

　　根據(jù)要求將培養(yǎng)基滅菌，通常蒸汽滅菌為121℃，15～20min。

　　8、斜面擺放

　　滅菌后及時(shí)擺放斜面，斜面長(zhǎng)度不超過試管管長(zhǎng)的二分之一為宜。

　　9、無菌檢查

　　將滅菌的培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作無菌檢驗(yàn)，通常30℃培養(yǎng)1～3天。無菌檢查合格后將其保存于4℃下備用。