（一)原理

　　Pctrifilm TM酵母菌和霉菌(Pctrifilm TM Yeast and Mold, PYM)測(cè)試片是一種預(yù)先制備好培養(yǎng)基的霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)的卡片。培養(yǎng)基中有作為載體的冷水可溶性凝膠和對(duì)酵母菌和霉菌敏感的5-溴-4-氯-3吲哚基-磷酸鹽指示劑，以及抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的四環(huán)素、氯霉素。圓形生長(zhǎng)區(qū)域劃分為30個(gè)1 cm x1 cm的方格用來(lái)計(jì)數(shù)。

　　(二)設(shè)備和材料

　　恒溫培養(yǎng)箱(25 ℃~28 ℃),冰箱(0℃~4℃),均質(zhì)器(旋刀式或拍擊式),移液器， Pctrifilm TM測(cè)試片壓板，振蕩器，天平(感量0.1 g),培養(yǎng)基和試劑， Pctrifilm TM酵母菌和霉菌測(cè)試片，稀釋液， Butterfield's磷酸鹽緩沖液， 0.1%蛋白胨水。

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　　1.固體

　　以無(wú)菌操作將25 g樣品加入到225 mL的稀釋液(磷酸鹽緩沖液或0.1%蛋白胨水)中，8000 r/min均質(zhì)2 min (或放入無(wú)菌均質(zhì)袋中，用均質(zhì)器拍打2min),制成1 :10樣品勻液。

　　2.液體

　　取25 mL樣品原液，放入裝有225 mL,稀釋液的無(wú)菌玻璃瓶中，以30 cm幅度， 7s內(nèi)振搖25次，制成1 : 10樣品勻液。

　　將上述勻液做10倍系列梯度稀釋，根據(jù)樣品的污染程度，選擇適宜的2個(gè)-3個(gè)連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種2張測(cè)試片。

　　將PYM檢驗(yàn)測(cè)試片放在平坦的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，揭開上層膜，用移液器將1 ml樣液加到測(cè)試片的中央，輕輕覆蓋上層膜，用壓板平穩(wěn)壓下，使其均勻覆蓋在測(cè)試片的圓形培養(yǎng)面積上，拿起壓板，靜置至少1 min,使培養(yǎng)基凝固。

　　將測(cè)試片的透明面朝上放置于培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊不能超過(guò)20片，在25℃-28 ℃下培養(yǎng)3d-5d。

　　3.判讀

　　培養(yǎng)3d后觀察計(jì)數(shù)，如果5d后，測(cè)試片上的菌生長(zhǎng)過(guò)快，出現(xiàn)邊緣模糊的菌落，就用3d的計(jì)數(shù)結(jié)果作為估計(jì)菌落數(shù)。

　　在PYM測(cè)試片上，顏色均勻一致，灰白色到藍(lán)綠色或粉紅色，沒有暗色中心，邊界明顯的小型隆起菌落計(jì)為酵母菌。顏色多樣(棕色、米色、橙色、藍(lán)綠色等)、中心顏色深暗的大型或小型扁平擴(kuò)散菌落計(jì)為霉菌。

　　(四)結(jié)果計(jì)算

　　選取菌落數(shù)在15~150之間的測(cè)試片計(jì)數(shù)，平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。

　?、偃绻邢♂尪鹊臏y(cè)試片上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1乘以低稀釋倍數(shù)報(bào)告。

　　②如果所有稀釋度測(cè)試片上的菌落數(shù)都小于15,則計(jì)數(shù)稀釋度低的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。

　?、廴绻呦♂尪鹊木鋽?shù)大于150,計(jì)數(shù)高稀釋度的測(cè)試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。計(jì)數(shù)菌落數(shù)大于150個(gè)的測(cè)試片時(shí)，可計(jì)數(shù)一個(gè)或兩個(gè)具有代表性方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個(gè)方格內(nèi)(1cm2)的菌落數(shù)后乘以30即為測(cè)試片上估算的菌落數(shù)(圓形生長(zhǎng)面積為30 cm)。

　　計(jì)數(shù)在測(cè)試片上出現(xiàn)堆積和彼此覆蓋的霉菌菌落，可將測(cè)試片分成幾個(gè)區(qū)域，計(jì)算每個(gè)明顯暗色中心的菌落。大量的酵母菌可能會(huì)導(dǎo)致整個(gè)生長(zhǎng)區(qū)域呈現(xiàn)藍(lán)色，大量的霉菌也可導(dǎo)致整個(gè)生長(zhǎng)區(qū)域呈現(xiàn)藍(lán)、黑、黃等顏色，此時(shí)測(cè)試片中央可能沒有可見菌落，但圓形培面積的邊緣有許多小型菌落。當(dāng)發(fā)生這種情況時(shí)，不要估算菌落數(shù)，其結(jié)果計(jì)為“多不可計(jì)“ (too numerous to count, TNTC)。

　　報(bào)告每克或每毫升樣品中霉菌、酵母菌數(shù)，以“CFU/g或CFU/mL"表示。