雙抗體夾心法是試劑盒中檢測抗原的常用方法：
1.將特異性抗體與固體載體連接形成固體抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體和雜質(zhì)。
2.加入被檢標本：使其與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，使標本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。去除其他未結(jié)合的物質(zhì)。
第三步，加入酶標抗體：將固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。完全清洗未結(jié)合的酶標抗體。此時，固體載體上酶的量與樣品中檢測物質(zhì)的量正相關(guān)。
4.添加底物：夾心化合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顯色反應(yīng)的程度，可以定性或定量測定抗原。
在臨床檢測中，該方法適用于檢測蛋白質(zhì)等各種大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對被測抗原的外源抗體，就可以用來包被固相載體，制備酶偶聯(lián)物，建立這種方法。例如，抗體的來源是抗血清，用于包被和酶標記的抗體取自不同物種的動物。例如，在使用單克隆抗體時，一般選擇針對抗原上不同決定簇的兩種單克隆抗體，分別用于包被固相載體和制備酶偶聯(lián)物。這種雙位點夾心法具有較高的特異性，通過將被測標本與酶標抗體一起保溫，可用于一步檢測。
雙抗體夾心法檢測抗原的另一個注意點是類風(fēng)濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體，主要為IgM型，可與各種動物IgG的Fc片段結(jié)合。如果用于雙抗體夾心檢測的血清樣本中含有RF，可作為抗原成分，同時與固相抗體和酶標抗體結(jié)合，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。f(ab’)或Fab片段用作酶結(jié)合物的試劑，由于去除了Fc片段，可以消除RF干擾。
