3M測(cè)試片是美國(guó)3M公司研發(fā)的一種快速測(cè)試片。3M測(cè)試片相比傳統(tǒng)測(cè)試方法,大大的縮短了檢測(cè)工作時(shí)間,省略了培養(yǎng)基配制、高壓滅菌、平板傾注等繁瑣步驟,工作效率大幅提高,并且由于品質(zhì)的穩(wěn)定均一,克服了傳統(tǒng)測(cè)試方法存在的使用培養(yǎng)基批次不同、配置條件不同、配置人員不同而導(dǎo)致的差異性。3M快速測(cè)試方法得到了包括AOAC在內(nèi)的多個(gè)國(guó)際權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)證,在全球許多國(guó)家已獲官方機(jī)構(gòu)的正式批準(zhǔn),從而可以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性和世界各地的廣泛認(rèn)可。
3M測(cè)試片包括菌落總數(shù)、大腸菌群、大腸菌群/大腸桿菌、金黃色葡萄球菌霉菌和酵母菌、環(huán)境李斯特等很多種類(lèi)。
1.操作方法
①未開(kāi)封時(shí),置于≤8℃冷藏,注意外包裝上的保存期限,打開(kāi)包裝時(shí),應(yīng)在室溫條件下。已開(kāi)封的,應(yīng)用壓條或膠帶封口后,置于室溫,一個(gè)月內(nèi)用完。
②稱(chēng)取樣品置于無(wú)菌均質(zhì)袋或均質(zhì)杯中,加入無(wú)菌稀釋液攪拌或均質(zhì)樣品,并用稀鹽酸或稀氫氧化鈉調(diào)pH至6.5~7.2。
注意:無(wú)菌稀釋液不可使用含有檸檬酸鹽、酸性亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽的緩沖液,這些稀釋液會(huì)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)。
?、蹖y(cè)試片置于平坦表面處,保持水平,揭開(kāi)上層膜,移液器或滴管吸1ml樣液垂直滴加在測(cè)試片的正中央。然后將上層膜慢慢落下,盡量不要出現(xiàn)氣泡,切勿向下滾動(dòng)上層膜。
?、軐喊宓膱A形內(nèi)凹面朝下,放置在上層膜的正中央,然后輕輕壓下,使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)基面積上,切不可扭轉(zhuǎn)壓板。
⑤拿起壓板,靜置1min以上等待培養(yǎng)基凝固。然后測(cè)試片的透明面朝上,可疊放20片,置于36℃培養(yǎng)48小時(shí),并保持培養(yǎng)箱的濕度。
2.判讀方法
?、倬淇倲?shù)測(cè)試片內(nèi),含有一種紅色指示染劑,可以使菌落呈現(xiàn)紅色便于計(jì)數(shù),計(jì)算所有紅色菌落,不論大小及顏色深淺。
?、跍y(cè)試片菌落計(jì)數(shù)的適宜計(jì)數(shù)范圍是25~250。
?、蹨y(cè)試片的計(jì)數(shù)面積約為20cm2。每一個(gè)黃色方框的面積是1cm2。當(dāng)菌落總數(shù)超過(guò)250個(gè)時(shí),為了估計(jì)菌落數(shù),可以選擇其中一個(gè)或幾個(gè)有代表性的小方框(1cm2)。計(jì)算平均菌落數(shù),然后再乘以20可得到測(cè)試片上的菌落數(shù)。
④當(dāng)測(cè)試片上的菌落太多而無(wú)法進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),記錄為“TNTC”。
?、萦泻芨邤?shù)量的菌落,使整個(gè)生長(zhǎng)區(qū)域變成粉色,或僅僅在生長(zhǎng)邊緣區(qū)域觀(guān)察到單個(gè)菌落,記錄為“TNTC”。
?、抻泻芨叩木鋽?shù)量,并且有時(shí)菌落會(huì)出現(xiàn)分布不均勻的情況,記錄為“TNTC”。
⑦可以看到直徑較大的菌落,并且可以計(jì)數(shù),但是仔細(xì)觀(guān)察時(shí),會(huì)發(fā)現(xiàn)非常密集非常細(xì)小的菌落分布在計(jì)數(shù)區(qū)域內(nèi),此時(shí)記錄為“TNTC”。
?、嗪苌贁?shù)量的菌種,會(huì)將測(cè)試片上的培養(yǎng)基液化,在計(jì)數(shù)區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)粉紅色的液化區(qū),此時(shí)不要記錄液化區(qū)內(nèi)的紅點(diǎn),應(yīng)選擇沒(méi)有被液化區(qū)域內(nèi)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),選取沒(méi)有液化部分的幾個(gè)有代表性的小方格(1cm2)。計(jì)算平均菌落數(shù),然后乘以20。得到結(jié)果。
⑨注意和樣品殘?jiān)w粒進(jìn)行區(qū)。有些樣品中會(huì)含有一些紅色的殘?jiān)w粒,菌落應(yīng)該是紅色規(guī)則的圓形,而顆粒的形狀是不規(guī)則的。如果樣品以紅色顆粒為主(比如辣椒粉),這類(lèi)樣品的菌落總數(shù)檢測(cè),不宜采用3M菌落總數(shù)測(cè)試片。
3M大腸桿菌/大腸菌群測(cè)試片
1.操作方法
操作方法與3M菌落總數(shù)測(cè)試片基本相同,只是不需要壓板,直接把1ml樣液加到中間紅色圓形區(qū)域內(nèi),然后將上層膜輕輕放下,盡量不要產(chǎn)生氣泡。然后可以輕輕的轉(zhuǎn)動(dòng)一下紙片,使樣液可以均勻地分布在中間紅色的圓形區(qū)域內(nèi)。
2.判讀方法
大腸菌群在紙片上呈現(xiàn)紅色菌落,緊貼著菌落有氣泡,大腸桿菌在紙片上呈藍(lán)色菌落緊貼菌落有氣泡。此時(shí)應(yīng)注意區(qū)分只有紅色或藍(lán)色菌落而沒(méi)有氣泡的情況,或者氣泡不是緊貼著菌落,或者只有氣泡無(wú)菌落生長(zhǎng),都不應(yīng)列入計(jì)數(shù)范圍。此外還應(yīng)區(qū)別樣品殘?jiān)湍繕?biāo)菌落。