一、原理及適用范圍

　　菌落總數是指樣品經過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數，是常用的微生物檢測項目。菌落總數測試片（FilmplateTM Aerobic BB202）是一種預先制備好的一次性培養(yǎng)基產品，含有標準的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，這樣可縮短計數時間和增強計數效果。本產品適合于各類食品及食品原料中菌落總數的測定，也可用于檢測食品加工容器、操作臺和其他設備表面的菌落總數。執(zhí)行標準：食品安全國家標準 食品微生物學檢驗菌落總數測定（GB/T 4789.2-2010）。

　　二、操作方法

　　1、樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質杯內，制成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節(jié)樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。

　　2、接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數測試片（BB202）置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養(yǎng)基凝固，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。

　　3、培養(yǎng)：將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內，堆疊片數不超過12片。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h；水產品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48h。

　　三、結果判讀

　　細菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（30～300個）的測試片進行計數，乘以稀釋倍數后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細菌菌落總數。

　　菌落總數測試片檢測水質操作方法：

　　揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品水樣勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右使培養(yǎng)基凝固，同時用純凈水（怡寶水）做一片空白陰性對照。將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內，堆疊片數不超過12片。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h；

　　結果判讀：細菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（30～300個）的測試片進行計數，即為每毫升樣品中所含的細菌菌落總數。