基因工程試劑對(duì)免疫分析技術(shù)發(fā)展的影響:
免疫分析技術(shù)是基于抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),因此任何診斷試劑都離不開原材料,如抗原與抗體、酶等。以前,免疫測定中使用的抗原通常是純化的抗原,而抗體是通過用純化的抗原免疫動(dòng)物獲得的多克隆抗體和通過雜交瘤技術(shù)獲得的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)記的綴合物是通過各種常規(guī)化學(xué)合成方法制備的。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,利用基因工程方法制備各種特殊抗原或抗體及其酶偶聯(lián)物等免疫學(xué)檢測試劑已成為新一代試劑,各種新的檢測方法不斷出現(xiàn)。
免疫分析中使用的早期基因工程抗原是乙型肝炎病毒抗原和乙型肝炎表面抗原。這兩種基因工程抗原的出現(xiàn),解決了抗HBc和HBe檢測的難題。因?yàn)楹茈y從病毒本身獲得大量的這兩種純抗原,而這對(duì)于難以培養(yǎng)的病原微生物來說是很常見的,比如HIV、HCV和梅毒螺旋體。
-美國ortho公司克隆的C1003抗原的幾個(gè)片段與人超氧化物歧化酶(SOD)結(jié)合。酵母用于從病毒基因組的非結(jié)合區(qū)獲得表達(dá),表達(dá)為融入蛋白,也用作包被的固體載體。
-抗原組合:NS4區(qū)的兩個(gè)基因片段分別是NS 5-1-1和C1003-特點(diǎn):IgG抗C100在發(fā)病幾個(gè)月后才檢測出來,不適合早期診斷。
-約20%的患者沒有抗體。急性期IgM抗C100的檢出率僅為64%。
-C100的抗原性較弱,在HCV復(fù)制中不能充分暴露宿主的免疫系統(tǒng)。
-特異性和敏感性差。