使用試劑盒前，充分混合所有試劑。不要使液體產生大量氣泡，以免加樣時加入大量氣泡，造成加樣誤差。
根據(jù)待測樣品的數(shù)量加上標準的數(shù)量，確定所需的板數(shù)。建議對每個標準孔和空白孔重新鉆孔。每個樣本根據(jù)自己的數(shù)量來定，能重新打孔的盡量重新打孔。用樣本稀釋液1: 1稀釋樣本，并向反應孔中加入50微升。
向反應孔中加入50微升稀釋的標準品，并向反應孔中加入50微升待測樣品。立即加入50ul生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕搖勻，37孵育1小時。
從孔中取出液體，用洗滌液填充每個孔，搖動30秒，取出洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)會增加一次。
向每個孔中加入80ul親和鏈霉親和素-HRP，輕輕搖勻，37孵育30分鐘。
利用試劑盒的定性夾心免疫分析技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板。這些多肽是中國HEV株核心氨基酸序列中的高抗原性多肽，分別來自該株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品添加到孔中并孵育。如果里面有HEV IgM抗體，這些抗體會和HEV多肽抗原結合，固定在上面。清洗板以去除樣品中的其他非特異性抗體和其他成分。只有含有HEV IgM抗體與酶結合物的復合物的孔才會變色，加入硫酸溶液使酶與底物的反應停止。
