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如何選擇正確的培養(yǎng)基培養(yǎng)原代細(xì)胞?

2021-06-17

   選擇怎樣的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞是一件令人糾結(jié)的工作。選擇已發(fā)表文章中用的培養(yǎng)基?補(bǔ)充添加物或額外營(yíng)養(yǎng)來優(yōu)化培養(yǎng)基?還是購(gòu)買商業(yè)化的配套培養(yǎng)基?重要的是,要了解不同的培養(yǎng)基會(huì)影響你的原代細(xì)胞培養(yǎng)及后續(xù)研究。

  許多研究人員通常使用經(jīng)典培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞系,這類培養(yǎng)基足夠用于細(xì)胞系的培養(yǎng)。但原代細(xì)胞往往需要額外的營(yíng)養(yǎng)才能有良好的性狀。細(xì)胞系和原代細(xì)胞之間存在差異,這些差異影響細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求。比如:細(xì)胞系增殖能力很強(qiáng),很好地適合于2維培養(yǎng),對(duì)培養(yǎng)條件的要求寬松。與此相反,原代細(xì)胞分離自3維生長(zhǎng)的宿主組織,然后轉(zhuǎn)移到2維環(huán)境中培養(yǎng),所以有著更為復(fù)雜的營(yíng)養(yǎng)需求。此外,原代細(xì)胞比細(xì)胞系的增值能力弱,隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移,原代細(xì)胞會(huì)越來越衰老,而且原代細(xì)胞壽命也短。由于這些差異,特殊培養(yǎng)基往往是原代細(xì)胞培養(yǎng)的一個(gè)更好的選擇。

  特殊培養(yǎng)基為每種特定的細(xì)胞類型進(jìn)行了優(yōu)化,通常比傳統(tǒng)培養(yǎng)基更復(fù)雜。特殊培養(yǎng)基通常被設(shè)計(jì)為低濃度血清或者無血清,因此培養(yǎng)基需要額外補(bǔ)充生長(zhǎng)因子、脂肪和激素。這種通過添加特定的組分,可以使培養(yǎng)基的組分和濃度得到優(yōu)化,從而用于培養(yǎng)特定類型的細(xì)胞。

培養(yǎng)基

  為了要說明不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物對(duì)您的原代細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生影響,我們做了一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)。我們以不易培養(yǎng)的人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代細(xì)胞為例。分別在適于人真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基中和Sciencell優(yōu)化的特殊培養(yǎng)基(ECM;Cat# 1001)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)并比較。此外,我們觀察和比較了高濃度血清(FBS 10%)與低濃度血清(FBS 5%)+內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加物(ECGS;Cat# 1052,含有混合激素和生長(zhǎng)因子)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)的影響。

  雖然開始的細(xì)胞接種密度相同,但細(xì)胞在不同培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況非常不同。我們觀察到:1.在DMEM / F12培養(yǎng)細(xì)胞的過程中,添加5%FBS和ECGS的組合比與10%FBS生長(zhǎng)更快。我們還觀察到細(xì)胞在這些條件下與內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基生長(zhǎng)有相似的趨勢(shì)。這表明低濃度血清+生長(zhǎng)因子和激素組合對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖更有利。2.比較不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基都添加5%FBS和ECGS后對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果與DMEM / F12相比,ECM培養(yǎng)細(xì)胞不僅生長(zhǎng)更快,而且具有更緊湊的形態(tài)。

  這些研究結(jié)果并不限于微血管內(nèi)皮細(xì)胞。我們使用大血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行了相同的實(shí)驗(yàn),獲得了類似的結(jié)果??傊@些圖顯示了優(yōu)化后的專用培養(yǎng)基+補(bǔ)充劑對(duì)原代細(xì)胞生長(zhǎng)具有更為有利和顯著的影響。請(qǐng)記住,您培養(yǎng)的原代細(xì)胞越健康,您的結(jié)果才越接近真實(shí)的狀況。

  總之,考慮原代細(xì)胞與細(xì)胞系直接存在明顯區(qū)別,原代細(xì)胞的生長(zhǎng)需要更為復(fù)雜,所以選擇適合培養(yǎng)基去培養(yǎng)才能保證細(xì)胞的良好狀態(tài)。在ScienCell公司,我們投入了大量的時(shí)間和資源,為每種原代細(xì)胞類型尋找好的培養(yǎng)基。我們的原代細(xì)胞專用培養(yǎng)基套,包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基,生長(zhǎng)添加物,青霉素/鏈霉素和FBS(如果需要)優(yōu)化結(jié)合使用,能夠保證原代細(xì)胞培養(yǎng)的良好狀態(tài)。


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