細(xì)胞培養(yǎng)市場(chǎng)上有不同品牌,不同種類的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,但是其配方都是大同小異,都含有幾種相同的重要組分,那么我們逐一說(shuō)明。
1、葡萄糖
葡萄糖濃度代表什么
培養(yǎng)基中的葡萄糖濃度范圍從1g/L(5.5mM)到10g/L(55mM)
5.5mM的葡萄糖濃度與體內(nèi)正常血糖的濃度類似
高糖培養(yǎng)基可以滿足腫瘤細(xì)胞等非生理狀態(tài)細(xì)胞的體外培養(yǎng)需求
選擇高糖還是低糖培養(yǎng)基
根據(jù)不同細(xì)胞類型選擇
通常原代細(xì)胞、干細(xì)胞使用低糖培養(yǎng)基
永生細(xì)胞系等病理狀態(tài)的細(xì)胞使用高糖培養(yǎng)基
2、丙酮酸鈉
作用
葡萄糖不足時(shí)為細(xì)胞提供碳源
直接進(jìn)入三羧酸循環(huán),可以被快速利用
什么情況下添加丙酮酸鈉
之前培養(yǎng)條件已含有丙酮酸鈉
代謝旺盛的細(xì)胞
丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,-20℃保存,培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.
3、酚紅
pH值指示劑
培養(yǎng)基顏色的變化幫助細(xì)胞培養(yǎng)者判斷是否需要換液等操作
什么情況下建議選擇無(wú)酚紅培養(yǎng)基
酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素),干預(yù)某些細(xì)胞在克隆級(jí)密度時(shí)生長(zhǎng)。為避免固醇類反應(yīng),在干細(xì)胞培養(yǎng)或者進(jìn)行低密度細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí),應(yīng)使用無(wú)酚紅的培養(yǎng)基。
4、HEPES
作用
穩(wěn)定pH值
本身沒(méi)有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,會(huì)提高滲透壓,并降低酚紅對(duì)pH值的指示作用
什么情況下需要加HEPES
培養(yǎng)條件pH波動(dòng)劇烈
細(xì)胞對(duì)pH敏感
Hepes的貯存液濃度一般為1M,常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM
5、谷氨酰胺
幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20℃冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。
試驗(yàn)操作中常配制高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支),分裝使用,-20℃保存。使用時(shí),每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培養(yǎng)基中,使其終濃度為2mM培養(yǎng)基。
誤區(qū):
培養(yǎng)基中的谷氨酰胺容易降解,需要不斷補(bǔ)充
正確方案:
如果正確使用,一般不需要補(bǔ)加,如:4℃避光保存;分裝,不要反復(fù)預(yù)熱。
6、NaHCO3
作用
與CO2一起形成緩沖系統(tǒng),保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。
7、GlutaMAXTM
GlutaMAXTM 替代L-谷氨酰胺
極為穩(wěn)定,可常溫、2~8℃以及-5~-20℃保存
毒性氨積累小化
使細(xì)胞的性能達(dá)到好的
提高細(xì)胞成活和生長(zhǎng)
建議不要將其用于昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)
由于釋放谷氨酰胺有一定的延遲,不建議用于剛復(fù)蘇的細(xì)胞